Όταν ο Μωυσής έφυγε από την Αίγυπτο έφτασε στη Μαδιάμ και φιλοξενήθηκε από τον Ιοθόρ. Ο Ιοθόρ είχε πρόβατα, που για κάποιο διάστημα τα φύλαξε ο Μωυσής (Έξοδος 3:1). Ο Μωυσής παντρεύτηκε τη κόρη του Σεπφώρα και γέννησε το Γηρσώμ (Γερσώμ, Έξοδος 2:21,22) και τον Ελιέζερ. Όταν ο Θεός κάλεσε το Μωυσή να επιστρέψει στην Αίγυπτο για να ελευθερώσει το λαό Ισραήλ, ο Μωυσής πήγε στον Ιοθόρ και ζήτησε τη συγκατάθεσή του, η οποία και του δόθηκε. Πήρε μαζί του τη γυναίκα του Σεπφώρα και τους δύο γιους του (Έξοδος 4:18-20), αλλά αργότερα στους έστειλε προσωρινά μαζί με τη σύζυγό του, πίσω στον Ιοθόρ (Έξοδος 18:2). Μετά την έξοδο των Ισραηλιτών από την Αίγυπτο και προτού φτάσουν στο Σινά, ο Ιοθόρ μαζί με την κόρη του και τα εγγόνια του πήγε στην έρημο όπου συνάντησε το Μωυσή (Έξοδος 18:7). Για όσα συνέβησαν ο Ιοθόρ πρόσφορε ολοκαυτώματα θυσίας στο Θεό (Έξοδος 18:9-12). Κατόπιν ο Ιοθόρ επέστρεψε πίσω στη χώρα του (Έξοδος 18:27).